PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH NHANH VÀ TIN CẬY BỆNH TRISTEZA TRÊN CAM BẰNG KỸ THUẬT ONE-STEP RT-PCR
Bệnh tristeza trên cây có múi là bệnh hại nguy hiểm do virus Citrus tristeza (CTV) gây ra và dẫn đến tàn lụi cây có múi, cuối cùng làm thiệt hại kinh tế nghiêm trọng cho các vùng trồng và sản xuất trên thế giới và Việt Nam. Những năm gần đây, diện tích cam ở miền Bắc nước ta đang ngày càng bị thu hẹp do sự bùng phát của bệnh tristeza. Do vậy, nhu cầu cây giống sạch bệnh là vô cùng lớn đối với các vùng sản xuất cam quan trọng; tuy nhiên, điều này làm cho việc sản xuất cây giống không có kiểm soát sẽ dẫn đến tình trạng bùng phát nghiêm trọng hơn. Để phát hiện CTV cho cây cam một cách nhanh chóng và đảm bảo độ tin cậy, kỹ thuật One-Step RT-PCR được sử dụng như là giải pháp tối ưu. RNA tổng số được tách chiết từ mẫu lá sử dụng Kít QIAGEN RNeasy Plant Mini. Bộ kít MyTaqTM One-Step RT-PCR được sử dụng cho phản ứng RT-PCR và cặp mồi đặc trưng cho gen mã hóa protein vỏ của virus để phát hiện bệnh CTV. Các sản phẩm PCR được điện di trên gel agarose 1% bổ sung Redsafe và hiển thị dưới máy UV quang phổ. Trường hợp các mẫu dương tính với CTV được nhận biết khi có 1 băng trùng với kích thước 672 bp; trong khi, những mẫu sạch thì không có sản phẩm khuếch đại. Như vậy, việc phát triển kỹ thuật RT-PCR một bước được sử dụng là phương pháp có độ nhạy và đáng tin cậy để phát hiện nhanh CTV trong các cây bị nhiễm bệnh ở giai đoạn sớm chưa có triệu chứng rõ ràng.